1引言什么是生物安全

?广义指与生物有关的各种因素对社会、经济、人类健康及生态系统所产生的危害或潜在风险。

狭义指现代生物技术的研究、开发、应用以及转基因生物的跨国越境转移可能对生物多样性、生态环境和人类健康产生潜在的不利影响。

同时包含防止发生病原体或毒素无意中暴露或意外释放的防护原则、技术和行为。

为什么要保障实验室生物安全

保护人员和环境免受感染性生物因子的潜在暴露。

发生实验室感染的主要途径

液体溢洒和喷溅到皮肤和粘膜；

注射器针头或其他污染锐器意外接种；

通过口吸移液或用手指或污染的物体触摸口或眼睛从而摄入或接触；

动物咬伤和抓伤；

吸入传染性气溶胶。

实验室相关感染安全事故及其原因

马尔堡出血热

（Marburghemorrhagicfever(MHF)）

马尔堡出血热的自然流行至今只局限于一些非洲国家。世界范围内共发生过三次马尔堡出血热的流行。年，当时在德国马尔堡、法兰克福和前南斯拉夫贝尔格莱德，几家疫苗实验室的工作人员在实验中接触一批来自乌干达的非洲绿猴后，同时出现严重出血热症状，有31人发病，其中7人死亡。

布鲁氏菌感染事故

（Brucellainfection）

年12月，东北农业大学应用技术学院学生在进行动物解剖时，学校２７名学生和１名教师感染布鲁氏菌。事故原因是实验动物未经检疫，实验操作时未进行有效防护。

减毒耶尔森氏鼠疫杆菌

（AttenuatedYersiniapestisstrain(KIMD27)）

年，美国伊利诺伊州芝加哥，一名60岁的研究人员发生减毒耶尔森氏鼠疫杆菌职业暴露（感染途径未知），并于三天后死亡。事故原因是操作者未严格遵守实验室制度，在从事减毒耶尔森氏鼠疫杆菌操作时未戴手套。

SARS

年，台湾军方某BSL-4实验室，一位研究员在操作过程中，发现衔接运输舱里装有实验废弃物的塑料袋破裂，未戴手套清理运输箱里的废弃物，因而感染了SARS。

年，新加坡国立大学某实验室，在同一实验室中同时操作WestNileVirus和有活性的SARS-CoV，造成交叉污染，导致一名研究生感染。

年，中国疾病预防控制中心病毒病控制所，研究人员使用未经严格验证的灭活SARS病毒在普通实验室进行实验，造成实验室人员及其亲属等9人感染，其中1人死亡。

2生物安全通用准则

微生物和生物医学实验室生物安全通用准则（WS-）

本标准规定了微生物和生物医学实验室生物安全防护的基本原则、实验室的分级、各级实验室的基本要求。

本标准为最低要求。本标准适用于疾病预防控制机构、医疗保健、科研机构。

实验室生物安全通用要求（GB-）

本标准规定了实验室生物安全管理和实验室的建设原则，同时，还规定了生物安全分级、实验室设施设备的配置、个人防护和实验室安全行为的要求。

本标准为最低要求。

1实验室分类和分级2生物安全柜

处理危险性微生物时所用的箱形空气净化安全装置

一级生物安全柜可保护工作人员和环境而不保护样品。一级生物安全柜本身无风机，依赖外接通风管中的风机带动气流，由于不能对试验品或产品提供保护，目前已较少使用。

二级生物安全柜是目前应用最为广泛的柜型。Ⅱ级生物安全柜内试验品不会受到外界空气的污染。安全柜工作区域的试验品不被外界尘埃或细菌污染。

三级生物安全柜是为4级实验室生物安全等级而设计的，是目前世界上最高安全防护等级的安全柜。柜体完全气密，%全排放式，所有气体不参与循环，工作人员通过连接在柜体的手套进行操作，俗称手套箱(Golvebox)，试验品通过双门的传递箱进出安全柜以确保不受污染，适用于高风险的生物试验。

使用注意事项

1.缓慢移动原则：为了避免影响正常的风路状态，柜内操作时手应该尽量平缓移动。

2.物品平行摆放原则：为了避免物品和物品之间的交叉污染现象产生，在柜内摆放的物品应该尽量呈横向一字摆开，避免回风过程中造成交叉污染。同时避免堵塞背部回风隔栅影响正常风路。

3.避免震动原则：柜内尽量避免震动仪器（例如离心机、旋涡振荡器等）的使用，因为震动会使得积留在滤膜上的颗粒物质抖落，导致操作室内部洁净度降低，同时如果在前操作面平衡失败还会引起安全柜对操作者的污染。

4.不同样品柜内移动原则：柜内两种及以上物品需要移动时，一定遵循低污染性物品向高污染性物品移动原则，避免污染性高的物品在移动过程中产生对柜体内部的大面积污染。

5.明火使用原则：柜内尽量不要使用明火。因为在明火使用过程中产生的细小颗粒杂质将被带入滤膜区域，这些高温杂质会损伤滤膜。无法避免一定需要使用的时候，宜使用低火苗的本生灯。

3安全防护生物安全防护实验室安全设备和个体防护要求

一级生物安全防护实验室

一般无须使用生物安全柜等专用安全设备。

工作职员在实验时应穿工作服，戴防护眼镜。

工作职员手上有皮肤破损或皮疹时应戴手套。

二级生物安全防护实验室

●可能产生致病微生物气溶胶或出现溅出的操纵均应在生物安全柜(II级生物安全柜为宜)或其他物理抑制设备中进行，并使用个体防护设备。

●处理高浓度或大容量感染性材料均必须在生物安全柜(II级生物安全柜为宜)或其他物理抑制设备中进行，并使用个体防护设备。上述材料的离心操纵假如使用密封的离心机转子或安全离心杯，且它们只在生物安全柜中开闭和装载感染性材料，则可在实验室中进行。

●当微生物的操纵不可能在生物安全柜内进行而必须采取外部操纵时，为防止感染性材料溅出或雾化危害，必须使用面部保护装置(护目镜、面罩、个体呼吸保护用品或其他防溅出保护设备)。

●在实验室中应穿着工作服或罩衫等防护服。离开实验室时，防护服必须脱下并留在实验室内。不得穿着外出，更不能携带回家。用过的工作服应先在实验室中消毒，然后同一洗涤或丢弃。

●当手可能接触感染材料、污染的表面或设备时应戴手套。如可能发生感染性材料的溢出或溅出，宜戴两副手套。不得戴着手套离开实验室。工作完全结束后方可除往手套。一次性手套不得清洗和再次使用。

三级生物安全防护实验室

●实验室中必须安装Ⅱ级或Ⅱ级以上生物安全柜。

●所有涉及感染性材料的操纵应在生物安全柜中进行。当这类操纵不得不在生物安全柜外进行时，必须采用个体防护与使用物理抑制设备的综合防护措施。

●在进行感染性组织培养、有可能产生感染性气溶胶的操纵时，必须使用个体防护设备。

●当不能安全有效地将气溶胶限定在一定范围内时，应使用呼吸保护装置。

●工作职员在进进实验室工作区前，应在专用的更衣室(或缓冲间)穿着背开式工作服或其他防护服。工作完毕必须脱下工作服，不得穿工作服离开实验室。可再次使用的工作服必须先消毒后清洗。

●工作时必须戴手套(两副为宜)。一次性手套必须先消毒后丢弃。

●在实验室中必须配备有效的消毒剂、眼部清洗剂或生理盐水，且易于取用。可配备应急药品。

四级生物安全防护实验室

●四级生物安全防护实验室分为：安全柜型实验室和穿着正压服型实验室。在安全柜型实验室中，所有微生物的操纵均在Ⅲ级生物安全柜中进行。在穿着正压服型实验室中，工作职员必须穿着特殊的正压服式保护服装。

●在实验室中所有感染性材料的操纵都必须在Ⅲ级生物安全柜中进行。假如工作职员穿着整体的由生命维持系统供气的正压工作服，则相关操纵可在Ⅱ级生物安全柜中进行。

●所有工作职员进进实验室时都必须换上全套实验室服装，包括亵服、内裤、衬衣或连衫裤、鞋和手套等。所有这些实验室保护服在淋浴和离开实验室前均必须在更衣室内脱下。

4实验室安全管理

1.实验室准入规定

（1）张贴警告标志。如果实验涉及危险度高于二级的微生物时，在实验室入口处应标有国际通用的生物危害警告标志。

（2）经实验室安全培训并通过的人员才能进入实验室工作区域，其他人员不能进入。

（3）与实验无关的动物不能带入实验室。

2.实验室工作区

（1）实验室保持干净整洁，不应在实验室内摆放与实验无关的物品。

（2）在实验室不能进食、饮水、吸烟，并应在明显位置张贴“禁止进食”、“禁止饮水”等标志。实验室工作区内的任何地方都不得储存食品及饮料。

（3）所有受污染的材料、样品和培养物在废弃或清洁再利用之前，必须清除污染。高压灭菌是清除污染的首选方法。

（4）每日工作完毕，所有操作台面、离心机、加样枪、试管架等必须擦拭、消毒。

（5）在没有人员进出时，实验室的门应保持关闭状态。

5实验室操作规范

1.通行规范

（1）实验前必须先熟悉实验所涉及内容的相关安全知识。

（2）进行任何涉及危险材料的实验均须采用安全设备，在实验前应检查安全设备是否能够正常使用。

（3）在进行所有样本、培养物的相关操作时都应戴手套。

（4）切勿用戴手套的手接触皮肤，禁止戴着手套在实验室来回走动或将手套带出实验室。

（5）切勿将液体、标签等实验物品放入口中或舔舐。

（6）所有样本、培养物和废弃物应以安全的方式处理和布置，并进行安全有效的保存。

（7）任何有形成气溶胶可能性的操作都必须在生物安全柜中进行。所有实验步骤都应尽可能使气溶胶或气雾的形成控制在最低程度。

（8）必须严格按操作规程使用移液器。

（9）在实验中应尽可能减少利器的使用，尽可能使用替代品。

（10）任何实验室事故或异常情况，无论大小都必须向实验室负责人报告并及时处置。

2.1安全行为（洗手）

实验室工作人员在实际或可能接触了血液、体液或其他污染材料后,即使戴有手套也应立即洗手。

摘除手套后、使用卫生间前后、离开实验室前、进食或吸烟前、接触每一患者前后应例行洗手。

实验室应为过敏或对某些消毒防腐剂中的特殊化合物有其他反应的工作人员提供洗手用的替代品。

洗手池不得用于其他目的。在限制使用洗手池的地点,使用基于乙醇的"无水"手部清洁产品是可接受的替代方式。

2.2安全行为（接触生物源性材料）

（1）处理、检验和处置生物源性材料的规定和程序应利用良好微生物行为标准。

（2）工作行为应可降低污染的风险。执行污染区内的工作行为应可预防个人暴露。

（3）如果样本在收到时有损坏或泄漏,应由穿着个人防护装备之受过培训的人员开启样本以防止漏出或产生气溶胶。应在生物安全柜内开启此类容器。如果污染过量或认为样本有不可接受的损坏,则应将样本安全地废弃而勿开启。

（4）禁止口吸移液。

（5）禁止用手对任何利器剪、弯、折断、重新戴套或从注射器上移去针头。安全工作行为应尽可能减少使用利器和尽量使用替代品。

（6）包括针头、玻璃、一次性手术刀在内的利器应在使用后立即放在耐扎容器中。尖利物容器应在内容物达到三分之二前置换。

（7）所有样本、培养物和废弃物应被假定含有传染性生物因子,应以安全方式处理和处置。

（8）所有有潜在传染性或毒性的质量控制和参考物质在存放、处理和使用时应按未知风险的样本对待。

（9）操作样本、血清或培养物的全过程应穿戴适当的且符合风险级别的个人防护装备。

（10）操作实验动物应穿戴耐抓咬、防水个人防护服和手套;应戴适当的面部、眼部防护装置,必要时,增加呼吸防护;应在生物安全柜内操作。

（11）摘除手套后一定要彻底洗手。

（12）应最好采用电子灼烧灭菌装置对微生物接种环灭菌。

2.3安全行为（气溶胶）

（1）实验室工作行为的设计和执行应能减少人员接触化学或生物源性有害气榕胶。

（2）样本只应在有盖安全罩内离心。

（3）所有进行祸流搅拌的样本应置于有盖容器内。

（4）在能产生气溶胶的大型分析设备上应使用局部通风防护,在操作小型仪器时使用定制的排气罩。

（5）在可能出现有害气体和生物源性气溶胶的地方应采取局部排风措施。

（6）饲养、操作动物应在适当的动物源性气溶胶防护设备中进行,工作人员应同时使用适当的个人防护设备。

3.不同等级生物安全实验室操作要求

3.1一级生物安全防护实验室

●禁止非工作人员进入实验室。参观实验室等特殊情况须经实验室负责人批准后方可进入。

●接触微生物或含有微生物的物品后，脱掉手套后和离开实验室前要洗手。

●禁止在工作区饮食、吸烟、处理隐形眼镜、化妆及储存食物。

●以移液器吸取液体，禁止口吸。

●制定尖锐器具的安全操作规程。

●按照实验室安全规程操作，降低溅出和气溶胶的产生。?每天至少消毒一次工作台面，活性物质溅出后要随时消毒。

●所有培养物、废弃物在运出实验室之前必须进行灭活，如高压灭活。需运出实验室灭活的物品必须放在专用密闭容器内。

●制定有效的防鼠防虫措施。

3.2二级生物安全防护实验室

常规微生物操作规程中的安全操作要点

同一级生物安全防护实验室安全操作规程1-9。

实验室入口处须贴上生物危险标志,内部显著位置须贴上有关的生物危险信息,包括使用传染性材料的名称,负责人姓名和电话号码。

特殊安全操作规程:

●严格遵守下列规定，防止利器损伤：除特殊情况(肠道外注射和静脉切开等)外，禁止在实验室使用针、注射器及其他利器。尽可能使用塑料器材代替玻璃器材；尽可能应用一次性注射器，用过的针头禁止折弯、剪断、折断、重新盖帽、从注射器取下，禁止用手直接操作。用过的针头必须直接放人防穿透的容器中。非一次性利器必须放入厚壁容器中并运送到特定区域消毒，最好进行高压消毒；尽可能使用无针注射器和其他安全装置；禁止用手处理破碎的玻璃器具。装有污染针、利器及破碎玻璃的容器在丢弃之前必须消毒。

●培养基、组织、体液及其他具有潜在危险性的废弃物须放在防漏的容器中储存、运输及消毒灭菌。

●实验设备在运出修理或维护前必须进行消毒。

人员暴露于感染性物质时，及时向实验室负责人汇报，并记录事故经过和处理方案。

●禁止将无关动物带入实验室。

3.3三级生物安全防护实验室

常规微生物操作规程中的安全操作要点?与二级生物安全防护实验室的要求相同。

特殊安全操作规程：

●实验室的门必须关上。

进入实验室的工作人员必须经实验室负责人同意，禁止干扰正在操作或辅助的工作人员。禁止免疫耐受和正在使用免疫抑制剂的工作人员进入实验室；禁止临时有病或有皮肤破损者在实验室工作；禁止未成年人进入实验室。

●实验室入口处必须贴上生物危险标志，注明危险因子、生物安全级别、需要的免疫、实验室负责人或其他相关负责人姓名和电话、进入实验室的特殊要求及离开实验室的程序。

●建立严格的实验室规章制度，有关人员进入实验室时必须明确进入和离开实验室的程序。建立出入登记册制度。

●工作人员应接受必要的免疫接种和检测(如乙肝疫苗、卡介苗)，并定期进行检查。

●收集工作人员和其它风险人群的基本血清留底，以后根据需要定期收集血清样本，应有检测报告，如有问题及时处理。

●将生物安全程序纳入实验室标准操作规范或生物安全手册，向所有工作人员提供生物安全手册。告知工作人员实验室的特殊危险，工作人员要阅读并按照规范的要求操作。

●实验室及其辅助工作人员要接受有关的潜在危险知识的培训，掌握预防暴露以及暴露后的处理程序。每年要接受最新的培训。

●在进入实验室之前，实验室负责人有责任向所有工作人员提供标准微生物学操作规范和技术，仪器操作规范。并由专家提供特殊培训。

●实验所需物品必须经传递窗送入。

●严格遵守下列规定，防止利器损伤：除肠道外注射和静脉切开等特殊情况，严禁在实验室使用针、注射器及其他利器。尽可能用塑料器材取代玻璃器材；注射和吸取感染性液体时必须用一次性注射器，用过的针头禁止折弯、折断、剪断、重新盖上帽、从注射器取下，禁止用手直接操作。应将其放在不锈钢容器中。非一次性利器必须放到厚壁容器中，运到特定区域消毒，最终进行高压消毒；尽可能使用无针注射器和其他安全装置，装有污染的针、利器及破碎玻璃的容器在丢弃之前必须进行高压灭菌。禁止用手处理破碎的玻璃器具。

●禁止在开放的实验台上和容器内进行感染性物质的操作，应在生物安全柜或其他物理设备中进行。生物安全柜内的工作台表面用适当的消毒剂清理。

●培养基、组织、体液及其他废弃物必须放在防漏的容器中储存及运输。●感染性实验结束后，尤其在感染性物质溢出和溅出后，应由专业人员或经过正规培训的人员进行消毒和清理。实验室中必须备有溢出物处理程序的文件。

●污染的设备在运出维修前必须消毒。所有废弃物或物品，在丢弃或重新使用前必须消毒。

●建立实验室事故和暴露的报告系统。感染性物质溢出及暴露事故发生后，必须及时消毒处理，并向实验室负责人汇报，并记录事故过程和处理经过。

●禁止将无关动植物带入实验室。

3实验室生物安全常识1生化试剂的安全使用

总原则：

药品状态定口径，瓶塞取决酸碱性；

受热见光易分解，存放低温棕色瓶；

特殊试剂特殊放，互不反应要记清。

标识

自配试剂应贴标签，并注明化合物名称、浓度、配制日期，以及配制人姓名。

易燃易爆化学试剂

闪点在25℃以下的化学试剂列入易燃化学试剂，它们多是极易挥发的液体，遇明火即可燃烧。

有毒化学试剂

以较小剂量进入人体而导致疾病或死亡的才被划为有毒物质。

腐蚀性化学试剂

化学试剂碰到皮肤、粘膜、眼、呼吸器官都有及时清洗，如各种酸和碱、溴、苯酚等。

强氧化性化学试剂

包括过氧化物和含有强氧化能力的含氧酸及其盐，如硝酸铵、高氯酸及其盐、重铬酸及其盐等。

放射性化学试剂

同位素示踪技术的发展，广泛应用于生物化学与分子生物学。由于其特殊性，该种试剂不得带入公共实验室，在各自实验室进行专项管理或者由学院进行统一管理。

不相容化学试剂

一些化学试剂在储存和操作过程中不能与其他物质接触，否则就发生爆炸，这些化学试剂称为不相容化学试剂。如：叠氮化物通常用作溶液中的抗菌剂，由于轻微碰撞就可能造成叠氮化铜的爆炸，因此不能与铜接触（如污水管及管道设施）。

溴化乙锭（EB）

一种强诱变剂（可能造成遗传性危害），直接接触有中等毒性。EB可以通过皮肤吸收，因此应当避免一切与EB的直接接触。EB对皮肤，眼睛，口腔和上呼吸道系统有刺激性作用。应将EB安全密封，并密闭存放于干燥避光处。

Trizol

提取组织和细胞RNA的一种重要试剂，在提取RNA时一定要在通风橱进行。如皮肤接触Trizol，请立即用大量去垢剂和水冲洗，废液埋入地下。

二乙基焦碳酸酯(Diethylprocarbonate)(DEPC)

RNA酶的强抑制剂，一种潜在的致癌物质。操作时戴口罩，在通风橱中进行。沾到手上立即冲洗，废液通过废液道排泄。

氯仿（Chloroform，CHCl3）

常用于DNA和RNA提取，对皮肤、眼睛、黏膜和呼吸道有强烈的刺激作用和腐蚀性，易损害肝和肾。操作时戴手套在通风橱里进行，废液收集后埋入地下。

丙烯酰胺（Acrylamide）

DNA测序、SSR及蛋白质分离等技术中作电泳支持物，具神经毒性，聚合后毒性消失。操作时戴手套在通风橱内进行，聚合后的聚丙烯酰胺凝胶没有毒性，可随普通垃圾一起扔掉，千万不要倒入下水道。

二甲亚砜（DMSO）

是一种既溶于水又溶于有机溶剂的非质子极性溶剂，常用作细胞的冻存液和配制AS。皮肤沾上之后用大量的水洗及1%~5%稀氨水洗涤。

叠氮钠（NaN3）

毒性非常大。它阻断细胞色素电子运送系统。含有叠氮钠的溶液要标记清楚。可因吸入、咽下或皮肤吸收而损害健康。戴合适的手套和安全护目镜，操作时要格外小心。

十二烷基硫酸钠（SDS）

有毒，易损害眼睛。质粒提取时作裂解液破坏细胞膜和Southern杂交时的洗膜液中的去垢剂。戴合适的手套和安全护目镜，不要吸入其粉末。

四甲基乙二胺（TEMED）

强神经毒性，防止误吸，操作时快速，存放时密封。

二硫苏糖醇（DTT）

很强的还原剂，散发难闻的气味。可因吸入、咽下或皮肤吸收而危害健康。当使用固体或高浓度储存液时，戴手套和护目镜，在通风橱中操作。

TritonX-

引起严重的眼睛刺激和灼伤。可因吸入、咽下或皮肤吸收而受害。戴合适的手套和护目镜。

苯甲基磺酰氟（PMSF）

一种高强度毒性的胆碱酯酶抑制剂。它对呼吸道黏膜、眼睛和皮肤有非常大的破坏性。可因吸入、咽下或皮肤吸收而致命。戴合适的手套和安全眼镜，始终在化学通风橱里使用。在接触到的情况下，要立即用大量的水冲洗眼睛或皮肤，已污染的工作服作为有害废物处理。

过硫酸铵(NH4)2S2O8

对黏膜和上呼吸道组织、眼睛和皮肤有极大危害性。吸入可致命。操作时戴合适的手套、安全眼镜和防护服。始终在通风橱里操作，操作完后彻底洗手。

吉姆萨（Giemsa）

染料咽下可致命或引起眼睛失明，通过吸入和皮肤吸收是有毒的。其可能的危险是不可逆的效应。戴合适的手套和安全护目镜。在化学通风橱里操作，不要吸入其粉末。

2微生物的危害及处理

重点任务：实验室感染的控制、实验室对周围环境影响的控制以及实验室和感染性实验材料的管理控制。

世界大多国家都是以致病微生物的危害程度进行分类，形成不同的实验室安全防护等级。我国一般以BSL-1、BSL-2、BSL-3、BSL-4表示实验室的相应生物安全防护水平;以ABSL-1、ABSL-2、ABSL-3、ABSL-4表示动物实验室的相应生物安全防护水平。

我国实验室生物安全法规

《病原微生物实验室生物安全管理条例》

《中华人民共和国传染病防治法》

《中华人民共和国传染病防治法实施办法》

《中华人民共和国国境卫生检疫法》

《中华人民共和国进出境动植物检疫法》

华人民共和国卫生行业标准《微生物和生物医学实验室生物安全通用准则》

《实验室生物安全通用要求》

《动物病原微生物菌（毒）种保藏管理办法》

《高致病性动物病原微生物实验室生物安全管理审批办法》

第三类病原微生物

指能够引起人类或者动物疾病，但一般情况下对人、动物或者环境不构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，并且具备有效治疗和预防措施的微生物。

高致病性动物病原微生物

指来源于动物的、《动物病原微生物分类名录》中规定的第一类、第二类病原微生物。

动物病原微生物分类名录（年农业部令第53号）

多种动物共患病病原微生物：

低致病性流感病毒、伪狂犬病病毒、破伤风梭菌、气肿疽梭菌、结核分支杆菌、副结核分支杆菌、致病性大肠杆菌、沙门氏菌、巴氏杆菌、致病性链球菌、李氏杆菌、产气荚膜梭菌、嗜水气单胞菌、肉毒梭状芽孢杆菌、腐败梭菌和其他致病性梭菌、鹦鹉热衣原体、放线菌、钩端螺旋体。

水生动物病病原微生物：

流行性造血器官坏死病毒、传染性造血器官坏死病毒、马苏大麻哈鱼病毒、病毒性出血性败血症病毒、锦鲤疱疹病毒、斑点叉尾鮰病毒、病毒性脑病和视网膜病毒、传染性胰脏坏死病毒、真鲷虹彩病毒、白鲟虹彩病毒、中肠腺坏死杆状病毒、传染性皮下和造血器官坏死病毒、核多角体杆状病毒、虾产卵死亡综合症病毒、鳖鳃腺炎病毒、Taura综合症病毒、对虾白斑综合症病毒、黄头病病毒、草鱼出血病毒、鲤春病毒血症病毒、鲍球形病毒、鲑鱼传染性贫血病毒。

重组核酸技术和生物安全

采用遗传工程技术人为设计出更多带有新型遗传物质的生物，既涉及到有生命活性的载体自身对实验室人员的生物安全，还存在大量投放于环境后的生物污染问题——此类问题造成的影响更是深远而不易觉察。

当考虑要构建或使用遗传修饰生物时，对实验室工作的危害度评估可能比从事遗传学正常生物（未修饰）工作的危害度评估更为重要，不能仅凭经验或未经验证的文献来评估此类生物的潜在危害。

例如：构建转基因动物常用的逆转录病毒载体，重组将外源基因转入体内的同时，伴随有致病性增强的过程。

必须经过验证明确所必需的生物安全级别，并对供体生物的特性、将要转移的核酸序列的性质、受体生物的特性以及环境特性做一综合评估，才能确定遗传修饰生物体所要求的生物安全水平，并做到安全操作目标基因。

生物表达系统：由符合一系列标准并可安全使用的载体和宿主细胞组成。如果所要插入的外源基因序列不要求更高级别的生物安全水平，大部分常规遗传工程实验可以按BSL-1安全操作大肠杆菌工程菌。用于基因治疗和有效转移基因到组织培养细胞的病毒载体，大多是复制缺陷型的，但操作时应采用与构建这些载体时的亲本病毒相同的生物安全水平。携带外源性遗传信息的动物（转基因动物）应当在靶基因编码产物特性的防护水平下进行操作，定点缺失特性基因的动物（基因敲除动物）一般不表现特殊的生物危害。

基因产物是否具有潜在的药理学活性是必须考虑的一项重要因素。比如，克隆、表达编码毒素的基因就需要较高的生物安全水平，因为当采用病毒载体过量表达这些毒素蛋白时有可能产生难以预料的后果。

危害度评估：一种动态过程，必须密切跟踪该生物因子研究的最新进展，一旦获得载体/宿主的新信息时，需要随时将相关工作归入更高或更低的生物安全水平。

3放射性物质的安全使用

使用同位素，防护先行！

基本任务和目的：按照辐射防护的三项基本原则，即辐射事业的正当化、防护水平的最优化和个人剂量的限额化。

放射性废物

放射性药品使用后残留和剩余部分。放射性废物处理不当会造成环境的放射性污染,影响工作人员和周围居民的健康。

固体废物的处理

主要采用放置法，被放射性药物污染的固体废物应存在固定的指定地点并采用适当的屏蔽物加以防护,待其自然衰变后,当作非放射性废物处理即可。如为过期的发生器吸附柱应标明日期并用塑料袋包装后置于贮源室,待其自然衰变后再处理。

液体废物的处理

应根据放射性物质的最大容许浓度、化学性质、放射性强度、废液的容积以及下水道的排水设备等情况进行不同的处理。一般采用放置法,半衰期短的也可用稀释法达到容许排放水平。放射性强度低的废水也可直接排入下水道,但其放射性浓度不得超过露天水源中限制尝试的倍。不能直接排入下水道的放射性废液,可采用衰变池贮存十个半衰后排入下水道。

注意

未经固化处理的放射性废液和浓缩物以及尚未选定最终处置方案的固化体等放射性废物，都应在固定地点贮存在专用的容器中，贮存过程中注意安全，不能使放射性废物泄漏。不同比活度的废物要求使用不同的贮罐。

放射性废物的转运

放射性废物转运的关键是废物的包装容器，事先要做好安全检验，对容器的强度、屏蔽防护、密封系统、包装的标志等都有严格的规定。要求做到安全运输，防止发生火灾、容器颠覆及包装破损而使放射性废物泄漏，污染环境。

4紫外线辐射的危害和防护

紫外辐射是指波长范围在nm—nm的光辐射，一般把nm—nm称作UVC，把nm—nm称作UVB，把nm—nm称作UVA。其中观察胶体用的最多的就是nm—nm的紫外线。

紫外线的有害效应主要是由于紫外线对脱氧核糖核酸（DNA）的作用造成的。最有害的效应是细胞致死，其它的效应则包括致突、致癌、干扰DNA、核糖核酸（RNA）和蛋白质的合成、细胞分裂的延迟、以及在通透性和能动性上的变化等。

紫外光对眼睛的损伤

白内障被认为过量紫外光辐射的主要原因，经紫外光照射后，射线大部分被角膜上皮细胞核蛋白吸收，导致细胞核膨胀，碎裂和细胞死亡，以至损伤眼角膜和晶状体，导致浑浊。总的说来，紫外光辐射增加，人类的白内障患者增加。

紫外光对人皮肤的损伤

紫外光的影响有积累作用，它的主要机理：蛋白质受紫外光照射后，形成光解产物，此外，其溶解度和粘度，对热变性的敏感性及荧光等物理化学和光学性质均有显著的改变。紫外光对皮肤的作用分为急性作用和慢性作用。急性作用表现为红斑效应其症状为水肿脱皮，全身症状有寒战，发烧，恶心，罕见循环衰竭。慢性作用如致皮肤老化，色素沉着，加速老化，甚至引起肿瘤。轻者皮肤出现水肿性红斑，重者会出现水疱或大疱，还可伴有休克，发热，畏寒，恶心，心悸和头昏等症状。

紫外光对其他部位的损伤

紫外光辐射对免疫系统的影响，免疫系统的一些成分存在于皮肤中，皮肤暴露在紫外光下，使得免疫系统受紫外光辐射，使其功能受到干扰。研究表明，紫外光辐射的免疫抑制作用可导致皮肤癌，同时引起一些传染病和其他一些疾病。

在实验室里常用的紫外光源包括手提式紫外灯和紫外透射仪、凝胶成像系统。只能通过吸收有害波长的滤片或安全玻璃片才能观察。在紫外光下操作时要戴合适的预防性手套，佩戴具有紫外线防护功能的护目镜和/或防护面罩，并遮蔽暴露的皮肤。

建议：使用荧光染料，切胶在Darkreader上操作。?DarkReader荧光透射仪(Transilluminators)的特点:

1.DarkReader使用新的无毒DNA染料:SYBRGreen,SYBRGold等,避免了EthidiumBromide(EB)染料对人体的伤害。

2.DarkReader使用可见光（-nm）,没有UV（紫外线），将其对人体的伤害降低至零。同时，大大降低了对DNA样本的损伤，克隆DNA的效率将成百倍的提高。

3.灵敏度高，远远高于UV检测仪。

4.适用染料范围广；荧光素（fluorescein）,AttoPhos,GelStar,VistraGreen,SYPROOrange,red-shiftedGFPvariants等都可使用。对于Rhodamines,EthidiumBromide(EB)等激发光大于nm的染料亦可适用；可以广泛用于DNA、RNA以及蛋白质的检测。

5.DarkReader同时提供琥珀色镜片的观察眼镜（AG16），供切割凝胶时使用。

紫外照射消毒后由于空气中臭氧富集，不宜立即开始工作，应在停止紫外照射30min后开始工作，有条件的实验室，可安装无臭氧紫外灯。

超净工作台中进行紫外照射消毒后，也应用强风进行吹扫后再进行工作，以免臭氧危害身体健康。

5废弃物的处理含有EB的废弃物

Sigma公司：

Ethidiumbromide/SYBR?greenreplacementcartridges

5replacementcartridgesfordecontaminationofsolutionscontainingEthidiumbromideorSYBR?Green;bindingcapacityforabovementionedfluorescentstains:50mg

price：约RMB

Qbiogene公司：

EtBrGreenBag?Disposal

TheEtBrGreenBag?Kitallowsrapidandtrouble-freeconcentrationofethidiumbromidefromlargevolumesofsolutionsintoasmall"teabag"whichisthenconvenientlydisposedalongwithothersolidhazardouswastes.Onekithasthecapacitytoremovemgofethidiumbromidefromsolutions(10mgEtBr/bag).

Price：约RMB

含有微生物的废弃物

大肠杆菌(Escherichiacoli,E.coli)是人和许多动物肠道中最主要且数量最多的一种细菌，主要寄生在大肠内。它侵入人体一些部位时，可引起感染，如腹膜炎、胆囊炎、膀胱炎及腹泻等。人在感染大肠杆菌后的症状为胃痛、呕吐、腹泻和发热。感染可能是致命性的，尤其是对孩子及老人。该菌对热的抵抗力较其他肠道杆菌强，55℃经60分钟或60℃加热15分钟仍有部分细菌存活。在自然界的水中可存活数周至数月，在温度较低的粪便中存活更久。大肠杆菌废弃物应分类收集进行消毒、烧毁处理，对大肠杆菌废弃物处理有如下方法：

固体废弃物：固体含菌培养基及一次性使用废弃物如枪头、塑料管、手套、帽子、口罩等使用后放入专用垃圾袋内集中烧毁。可重复利用的玻璃器材如试管、玻瓶等或塑料制品，可以先用朗索消毒片溶液浸泡(3片/0ml水，浸泡3小时以上)，然后清洗，再高压蒸汽灭菌后使用。

液体废弃物：液体含菌培养物加朗索消毒片处理后(5片/0ml水，浸泡3小时以上，根据菌液浓度可酌情增加消毒片剂量或延长浸泡时间)或者直接将菌液煮沸30min后方可倒入下水道，切勿直接将未处理含菌废液排入下水道。实验室大肠杆菌多为带抗性菌体，为防止实验室大肠杆菌实验废弃物随意排放对环境造成污染以及确保实验室工作人员安全，请各实验室积极配合，做好。

分子生物学实验操作常见废弃物

移液器吸头

使用过的移液器吸头应放入含有10%次氯酸钠溶液的容器内浸泡，浸泡时间不宜少于24h。

PCR产物

含有PCR产物的所有液体及废弃物应放入含有1mol/LHCl的容器中浸泡，浸泡时间不宜少于6h；采用PCR-ELISA方法检测时洗板机洗板所产生的废液应收集至1mol/LHCl溶液中。

阳性样品和质粒

阳性质粒宜放入1mol/LHCl溶液中浸泡，浸泡时间不宜少于6h。

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长按







































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